Alt-R User Voice | Integrated DNA Technologies 株式会社

Integrated DNA Technologies Japanese site

ユーザーボイス of Alt-R^® CRISPR-Cas9 System

本ページでは、Alt-RやgBlocks、Ultramer等の弊社製品をお使い頂いた場合のデータを記載しております。随時データを募集しております。

マウス受精卵

群馬大学生体調節研究所ゲノム科学リソース分野堀居拓郎先生
対象	マウス受精卵
導入方法	インジェクション
Cas9 - 種類	タンパク質 (NEB)
Cas9 - 濃度	20 ng/uL
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R^®) (IDT)
gRNA - 濃度	50 ng/uL
ノックイン用DNA - 種類	dsDNA (gBlocks)
ノックイン用DNA - 濃度	5 ng/uL
スクリーニング法	PCR (KI効率は約20%)
更新日	2016/05/10

University of Nebraska Medical Center, Mouse Genome Engineering Core Facility Dr. Rolen Quadros, Donald Harms and Dr. CB Gurumurthy
対象	マウス受精卵
導入方法	インジェクション
Cas9 - 種類	タンパク質 (IDT)
Cas9 - 濃度	20 ng/uL
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R^®) (IDT)
gRNA - 濃度	20 ng/uL
RNP - 濃度	20 ng/uL
プロトコール	こちらをご参照下さい。

東海大学医学部基礎医学系分子生命科学大塚正人先生
対象	マウス受精卵
導入方法	インジェクション
Cas9 - 種類	タンパク質 (IDT)
Cas9 - 濃度	50 ng/uL
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R^®) (IDT)
gRNA - 濃度	0.61 uM
ノックイン用DNA - 種類	long ssDNA (約800塩基 ivTRT法で調製)
ノックイン用DNA - 濃度	10 ng/uL
スクリーニング法	PCRによる配列長確認及びPCR断片のシーケンス (3遺伝子に対して行い、KI効率は約40〜70%)
プロトコール	論文発表予定
使用感	針詰まりすることもなく、問題なく使用できています。
更新日	2016/09/15

筑波大学生命科学動物資源センター水野聖哉先生
対象	マウス受精卵
導入方法	インジェクション
Cas9 - 種類	DNA
Cas9 - 濃度	5 ng/uL
gRNA - 種類	DNA
gRNA - 濃度	5 ng/uL
ノックイン用DNA - 種類	ssODN (ultramer)
ノックイン用DNA - 濃度	10 ng/uL
スクリーニング法	ダイレクトシーケンス解析
更新日	2016/11/17

筑波大学生命科学動物資源センター水野聖哉先生
対象	マウス受精卵
導入方法	インジェクション
Cas9 - 種類	DNA
Cas9 - 濃度	5 ng/uL
gRNA - 種類	DNA
gRNA - 濃度	5 ng/uL
ノックイン用DNA - 種類	DNA (環状のplasmid DNA)
ノックイン用DNA - 濃度	10 ng/uL
スクリーニング法	PCRと繋ぎ目部分のシークエンス
更新日	2016/11/17

岩手大学大学院総合科学研究科理工学専攻金子　武人先生
対象	マウス受精卵
導入方法	エレクトロポレーション
導入機器	NEPA21 (1mmgap電極使用)
Cas9 - 種類	タンパク質 (IDT)
Cas9 - 濃度	100 ng/uL
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R^®) (IDT)
gRNA - 濃度	500 ng/uL
Cas9-gRNA混合液	5 µL
プロトコール	Genome Editing in Mouse and Rat by Electroporation
更新日	2017/7/03

ネッパジーン株式会社
対象	マウス受精卵
導入方法	エレクトロポレーション
導入機器	NEPA21 (5mmgap電極使用)
Cas9 - 種類	タンパク質 (IDT)
Cas9 - 濃度	200 ng/uL
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R^®) (IDT)
gRNA - 濃度	200 ng/uL
Cas9-gRNA混合液	60 µL
プロトコール	For more information on protocols and electrical conditions, please contact Neppa Gene Corporation. プロトコールと電気条件の詳細については、ネッパジーン株式会社までお問い合わせください。
備考	上記数値は5mmgap 電極使用時です。NO.52のプロトコールには1mmgap電極使用時のプロトコールやノックインのプロトコールも含まれています。
更新日	2017/7/10

徳島大学先端酵素学研究所竹本龍也先生
対象	マウス受精卵
導入方法	エレクトロポレーション
導入機器	CUY21EDIT II / Genome Editor™ electroporator (BEX)
Cas9 - 種類	タンパク質 (IDT)
Cas9 - 濃度	100 ng/uL
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R^®) (IDT)
gRNA - 濃度	100 ng/uL
Cas9-gRNA混合液量	6 µL
プロトコール	Mouse zygote electroporation
更新日	2017/3/31

培養細胞

Integrated DNA Technologies ユーザーガイド
対象	HEK293 (接着細胞)
導入方法	リポフェクション
導入試薬	Lipofectamine™ RNAiMAX Reagent (Thermo Fisher)
Cas9 - 種類	タンパク質 (IDT)
Cas9 - 濃度	30 nM
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R^®) (IDT)
gRNA - 濃度	30 nM
スクリーニング法	T7E1法
プロトコール	ユーザーガイド

Integrated DNA Technologies ユーザーガイド
対象	HEK293 (接着細胞)
導入方法	エレクトロポレーション
導入機器	Amaxa Nucleofector™ (Lonza)
Cas9 - 種類	タンパク質 (IDT)
Cas9 - 濃度	4 uM
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R^®) (IDT)
gRNA - 濃度	4.6 uM
キャリアDNA - 種類	エレクトロポレーションエンハンサー
キャリアDNA - 濃度	4 uM
スクリーニング法	T7E1法
プロトコール	プロトコール

Integrated DNA Technologies ユーザーガイド
対象	Jurkat (TCell系浮遊細胞)
導入方法	エレクトロポレーション
導入方法	Neon™ Transfection System (Thermo Fisher)
Cas9 - 種類	タンパク質 (IDT)
Cas9 - 濃度	1.8 uM
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R^®) (IDT)
gRNA - 濃度	1.5 uM
キャリアDNA - 種類	エレクトロポレーションエンハンサー
キャリアDNA - 濃度	1.8 uM
スクリーニング法	T7E1法
ユーザーガイド	ユーザーガイド

ES細胞

群馬大学生体調節研究所ゲノム科学リソース分野堀居拓郎先生
対象	ES細胞
導入方法	リポフェクション
導入試薬	Lipofectamine2000 (Thermo Fisher)
Cas9 - 種類	自家製プラスミド
Cas9 - 濃度	400 ng/24well
gRNA - 種類	自家製プラスミド
gRNA - 濃度	400 ng/24well
ノックイン用DNA - 種類	dsDNA (gBlocks)
ノックイン用DNA - 濃度	40 ng/24well
スクリーニング法	FACSで容易にstable lineが得られた。(KI効率は約0.2%)
更新日	2016/05/10

iPS細胞

国立国際医療研究センター研究所疾患制御研究部小林徳彦先生
対象	i PS細胞
導入方法	エレクトロポレーション
導入機器	Amaxa Nucleofector™ (Lonza)
Cas9 - 種類	タンパク質 (IDT)
Cas9 - 濃度	6.1 uM
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R™) (IDT)
gRNA - 濃度	3 uM
ノックイン用DNA - 種類	DNAフラグメント
ノックイン用DNA - 量	2 ug
スクリーニング法	約10%のGFP(+)ラインが得られた。
プロトコール	準備中
更新日	2016/08/09

ネッパジーン株式会社
対象	ヒトiPS細胞
導入方法	エレクトロポレーション
導入機器	NEPA21
Cas9 - 種類	タンパク質 (IDT)
Cas9 - 濃度	3 µg/µL
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R^®) (IDT)
gRNA - 濃度	3 µg/µL
ノックイン用DNA - 量	3 µg/µL
Cas9-gRNA混合液量	6.8 µL (キュベット1個分)
プロトコール	For more information on protocols and electrical conditions, please contact Neppa Gene Corporation. プロトコールと電気条件の詳細については、ネッパジーン株式会社までお問い合わせください。
更新日	2017/7/10

ゼブラフィッシュ

筑波大学医学医療系分子発生生物学研究室小林麻己人先生
対象	ゼブラフィッシュ
導入方法	インジェクション
Cas9 - 種類	タンパク質 (IDT)
Cas9 - 濃度	400pg/nL (embryo)
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R^®) (IDT)
gRNA - 濃度	25 or 50 pg/nL (embryo)
スクリーニング法	HMA assay
使用感	十分な切断活性があると思います。
更新日	2016/12/26

Iowa State University, Department of Genetics, development, and Cell Biology Jeffrey Essner
対象	ゼブラフィッシュ
導入方法	インジェクション
Cas9 - 種類	タンパク質 (IDT)
Cas9 - 濃度	0.25 ug/nL
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R^®) (IDT)
gRNA - 濃度	1.5 uM
スクリーニング法	PCR
プロトコール	Zebrafish embryo microinjection ※リンク切れの際はこちらのページのsupprt タブのUser submitted methodsをご参照下さい。
更新日	2017/1/11

線虫

University of California,HHMI Investigator and Professor of Cell and Developmental Biology Simone Kohler
対象	線虫
導入方法	インジェクション
Cas9 - 種類	タンパク質 (IDT)
Cas9 - 濃度	17.5 uM
gRNA - 種類	合成RNA(Alt-R^®) (IDT)
gRNA - 濃度	17.5 uM
スクリーニング法	dpy-10 の修復もしくはマーカープラスミドの導入詳細はプロトコールをご参照くださいい。
プロトコール	C.elegans injection ※リンク切れの際はこちらのページのsupprt タブのUser submitted methodsをご参照下さい。
更新日	2017/1/11

ミドリムシ（Euglena gracilis）

理化学研究所環境資源科学研究センターバイオ生産情報研究チーム野村俊尚様
対象	ミドリムシ（Euglena gracilis）
導入方法&導入機器	エレクトロポレーション NEPA21 Super Elextroporator(2-mm gap cuvette EC-002) (NEPA GENE)
Cas9 - 種類	S.p. Cas9 Nuclease V3 (IDT)
Cas9 - 濃度	約1µM
gRNA - 種類	Alt-R^® CRISPR-Cas9 crRNA + tracrRNA (IDT)
gRNA - 濃度	1.2µM
ノックイン用DNA - 種類	ssODN (Ultramer DNA Oligo (IDT) )
ノックイン用DNA - 量	4 µM
スクリーニング法	T7E1 assay法(IDT)、アンプリコンシークエンス解析 (Thermo)^※
培養温度	28℃
プロトコール	https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/pbi.13174
更新日	2019/6/26

※ IDTも2019年4月にアンプリコンシーケンス用製品の販売を開始しました。

単位変換用エクセル

いくつかの論文において、濃度・容量等が様々な単位で書かれており、単位変換に時間が掛かってしまったので作成しました。このエクセルを用いれば容易に単位を変換できます。
なお、Alt-R製品の分子量はこちらをご参照下さい。

Excel

単位変換用エクセル
※2016/10/01 更新

ユーザーボイス of Alt-R® CRISPR-Cas9 System